第178章 微光
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四合院:家父李怀德 作者:佚名
第178章 微光
“上硅胶板。”
王主任这次主动说了话,李靖川的严谨和初步发现显然引起了他的兴趣。
薄层层析(tlc)在预製的硅胶g板上重复进行。
展开剂体系相同。
展开完毕的板子在空气中晾乾后,先被放在254纳米紫外灯下观察。
在淡紫色的萤光背景下,李靖川一眼就看到,在对应rf 0.32附近的位置,出现了一个明显的暗斑——这意味著该物质能吸收短波紫外光,很可能含有共軛结构或芳香环。
这正是他期待的特徵。
他用针尖在暗斑周围轻轻划出范围,然后用刮刀小心翼翼地將那片硅胶刮下,收集到小烧杯里,用甲醇反覆洗脱、过滤,得到一份极微量的、略显浑浊的溶液。
这就是初步分离得到的“目標化合物t-1”粗提物。
接下来是艰难的鑑定尝试。
他將已知的几种常见有机酸(柠檬酸、苹果酸、草酸)的標准品与t-1粗提物在同一块tlc板上进行共层析。展开后使用不同的显色剂(溴甲酚绿、苯胺-二苯胺磷酸等)显色。
结果清晰表明:t-1的斑点位置与这些常见有机酸均不重合,排除它们是同一种物质的可能。
深夜,李靖川抱著一本厚重的、边缘已磨得发毛的《植物次生代谢手册》回到实验室的灯光下。
他翻阅著关於酚酸类、植物螯合剂、根系分泌物章节,目光在“咖啡酸”、“绿原酸”、“麦根酸”等结构式和相关性质描述上流连。
t-1的层析行为、紫外吸收特性,似乎更指向酚酸类或某种特定的金属螯合配体。
“根系可能通过分泌特异性物质来应对锰的丰缺……”他在笔记本上写下思考,“锰充足时,大量分泌此物,或许用於锰的细胞內运输、储存或稳態调节;锰极度缺乏时,分泌此物,则可能用於活化根际难溶性锰,或增强吸收效率?”
他將t-1重新命名,赋予其更明確的含义:“锰诱导分泌物-1”,简称 mis-1。
想法需要验证。他设计了一个简单的生物测定实验:將含有微量mis-1粗提物的溶液,加入到正在水培、且已开始表现出缺锰症状的“京丰8號”幼苗营养液中。同时设置不加mis-1的缺锰对照,以及正常锰供应的对照。
四十八小时,在焦虑与期盼中缓慢流过。
当李靖川再次走到水培槽前时,心臟几乎要跳出来。
加了mis-1粗提物的“京丰8號”缺锰组,儘管锰浓度依旧极低,但原本蜷曲发黄的新叶,竟然有了些许展开的跡象,叶尖那令人揪心的苍白似乎淡了一点点。
而旁边的纯缺锰对照,症状则毫无缓解,甚至更严重了。
虽然变化极其细微,但放在並排对比的严格条件下,这差异清晰得不容忽视。
孙浩和赵雪梅轮流看了又看,最终都点了点头。
“它……好像真的有用。”
赵雪梅的声音很轻,像是怕惊扰了这个刚刚显现的奇蹟。
初步的生物活性被证实了。
mis-1,这个从伤流液层层筛选出的神秘斑点,似乎真的具备某种与锰相关的生理功能——无论是促进吸收、协助运输,还是某种保护作用。
狂喜尚未蔓延,现实的瓶颈已冰冷地摆在面前。
“小李,”王主任看著李靖川手中那支只装了不到半毫升浑浊液体的样品瓶,摇了摇头,语气不容商量,“你这点样品量,別说做红外、做核磁,连上个稍微像样点的气相色谱进样都不够。纯度也远远达不到结构鑑定的要求。巧妇难为无米之炊啊。”
分析测试中心的仪器轰鸣著,它们渴望著纯净、足量的样品,而李靖川手里只有这一点点从层层刮下的硅胶粉中洗脱出来的、充满杂质的“痕跡”。
怎么办?扩大伤流液收集规模?那需要成百上千株同步处理的植物,数个月的时间,这根本不现实。
李靖川站在实验台前,目光扫过那些tlc板、展开缸、和角落里堆积的硅胶g板空盒。
忽然,他的视线定格在板子尺寸上。標准板是10x20厘米,用於分析。
但还有一种更大的,20x20厘米,甚至更大的製备型薄层板……
一个念头像电光石火般闪过。
“王主任,”他转过身,眼睛亮得惊人,“如果我们不用分析板,改用大面积的製备型硅胶板。把现在这点粗提物,不是点成一个点,而是点成一条长长的线。然后展开,这样化合物在板上不是浓缩成一个斑点,而是分散成一条带。我们刮下这条目標带,洗脱,就能一次性得到比现在多得多的mis-1粗品。”
他语速加快,思路如泉涌:“一次不够,我们就重复十次,二十次!每次展开后都只收集rf 0.32附近的那条带。把所有粗品积累起来,虽然每次都有损失,但总量可以大大增加。然后,我们用积累的粗品,再上更大尺寸的製备板,用略有差异的展开剂系统进行二次、三次製备分离,一步步提高纯度……直到得到足以进行初步光谱分析的样品!”
王主任听著,脸上的严肃渐渐被一种惊讶和思索所取代。
他看了看李靖川,又看了看那些仪器,最后目光落回那点可怜的样品上。
“製备型薄层……反覆累积……”他低声重复著,手指无意识地敲著实验台面,“笨办法。费时费力,回收率低。但是……”他停顿了一下,抬起眼,“在没有更好办法的情况下,这可能是唯一能走通的路。”
他走到柜子前,打开,取出一盒未拆封的20x20厘米製备型硅胶板,放到李靖川面前。
“板子我有。溶剂药品,按需申请。”王主任的声音依旧没什么温度,但话里的意思却再明白不过,“不过小李,这条路可不好走。点样、展开、刮板、洗脱、浓缩……每一次都是体力活,都是损耗。你可能忙活几个星期,最后得到的还是不够纯、不够量的东西。”
李靖川接过那盒沉甸甸的板子,感受著指尖传来的分量。
“我知道,王主任。”他平静地回答,声音里没有畏难,只有一种找到方向后的沉稳,“但只要有路,就能走下去。一点点积累,一点点纯化。mis-1就在那里,我们总能碰到它。”
灯光下,那盒硅胶板安静地躺著,即將成为一场漫长、枯燥,却目標明確的微观“淘金”战役的主战场。
而探索者已经挽起袖子,准备用最原始也最执拗的方式,从复杂的生命分泌物中,打捞出那一点可能照亮机理的微光。
第178章 微光
“上硅胶板。”
王主任这次主动说了话,李靖川的严谨和初步发现显然引起了他的兴趣。
薄层层析(tlc)在预製的硅胶g板上重复进行。
展开剂体系相同。
展开完毕的板子在空气中晾乾后,先被放在254纳米紫外灯下观察。
在淡紫色的萤光背景下,李靖川一眼就看到,在对应rf 0.32附近的位置,出现了一个明显的暗斑——这意味著该物质能吸收短波紫外光,很可能含有共軛结构或芳香环。
这正是他期待的特徵。
他用针尖在暗斑周围轻轻划出范围,然后用刮刀小心翼翼地將那片硅胶刮下,收集到小烧杯里,用甲醇反覆洗脱、过滤,得到一份极微量的、略显浑浊的溶液。
这就是初步分离得到的“目標化合物t-1”粗提物。
接下来是艰难的鑑定尝试。
他將已知的几种常见有机酸(柠檬酸、苹果酸、草酸)的標准品与t-1粗提物在同一块tlc板上进行共层析。展开后使用不同的显色剂(溴甲酚绿、苯胺-二苯胺磷酸等)显色。
结果清晰表明:t-1的斑点位置与这些常见有机酸均不重合,排除它们是同一种物质的可能。
深夜,李靖川抱著一本厚重的、边缘已磨得发毛的《植物次生代谢手册》回到实验室的灯光下。
他翻阅著关於酚酸类、植物螯合剂、根系分泌物章节,目光在“咖啡酸”、“绿原酸”、“麦根酸”等结构式和相关性质描述上流连。
t-1的层析行为、紫外吸收特性,似乎更指向酚酸类或某种特定的金属螯合配体。
“根系可能通过分泌特异性物质来应对锰的丰缺……”他在笔记本上写下思考,“锰充足时,大量分泌此物,或许用於锰的细胞內运输、储存或稳態调节;锰极度缺乏时,分泌此物,则可能用於活化根际难溶性锰,或增强吸收效率?”
他將t-1重新命名,赋予其更明確的含义:“锰诱导分泌物-1”,简称 mis-1。
想法需要验证。他设计了一个简单的生物测定实验:將含有微量mis-1粗提物的溶液,加入到正在水培、且已开始表现出缺锰症状的“京丰8號”幼苗营养液中。同时设置不加mis-1的缺锰对照,以及正常锰供应的对照。
四十八小时,在焦虑与期盼中缓慢流过。
当李靖川再次走到水培槽前时,心臟几乎要跳出来。
加了mis-1粗提物的“京丰8號”缺锰组,儘管锰浓度依旧极低,但原本蜷曲发黄的新叶,竟然有了些许展开的跡象,叶尖那令人揪心的苍白似乎淡了一点点。
而旁边的纯缺锰对照,症状则毫无缓解,甚至更严重了。
虽然变化极其细微,但放在並排对比的严格条件下,这差异清晰得不容忽视。
孙浩和赵雪梅轮流看了又看,最终都点了点头。
“它……好像真的有用。”
赵雪梅的声音很轻,像是怕惊扰了这个刚刚显现的奇蹟。
初步的生物活性被证实了。
mis-1,这个从伤流液层层筛选出的神秘斑点,似乎真的具备某种与锰相关的生理功能——无论是促进吸收、协助运输,还是某种保护作用。
狂喜尚未蔓延,现实的瓶颈已冰冷地摆在面前。
“小李,”王主任看著李靖川手中那支只装了不到半毫升浑浊液体的样品瓶,摇了摇头,语气不容商量,“你这点样品量,別说做红外、做核磁,连上个稍微像样点的气相色谱进样都不够。纯度也远远达不到结构鑑定的要求。巧妇难为无米之炊啊。”
分析测试中心的仪器轰鸣著,它们渴望著纯净、足量的样品,而李靖川手里只有这一点点从层层刮下的硅胶粉中洗脱出来的、充满杂质的“痕跡”。
怎么办?扩大伤流液收集规模?那需要成百上千株同步处理的植物,数个月的时间,这根本不现实。
李靖川站在实验台前,目光扫过那些tlc板、展开缸、和角落里堆积的硅胶g板空盒。
忽然,他的视线定格在板子尺寸上。標准板是10x20厘米,用於分析。
但还有一种更大的,20x20厘米,甚至更大的製备型薄层板……
一个念头像电光石火般闪过。
“王主任,”他转过身,眼睛亮得惊人,“如果我们不用分析板,改用大面积的製备型硅胶板。把现在这点粗提物,不是点成一个点,而是点成一条长长的线。然后展开,这样化合物在板上不是浓缩成一个斑点,而是分散成一条带。我们刮下这条目標带,洗脱,就能一次性得到比现在多得多的mis-1粗品。”
他语速加快,思路如泉涌:“一次不够,我们就重复十次,二十次!每次展开后都只收集rf 0.32附近的那条带。把所有粗品积累起来,虽然每次都有损失,但总量可以大大增加。然后,我们用积累的粗品,再上更大尺寸的製备板,用略有差异的展开剂系统进行二次、三次製备分离,一步步提高纯度……直到得到足以进行初步光谱分析的样品!”
王主任听著,脸上的严肃渐渐被一种惊讶和思索所取代。
他看了看李靖川,又看了看那些仪器,最后目光落回那点可怜的样品上。
“製备型薄层……反覆累积……”他低声重复著,手指无意识地敲著实验台面,“笨办法。费时费力,回收率低。但是……”他停顿了一下,抬起眼,“在没有更好办法的情况下,这可能是唯一能走通的路。”
他走到柜子前,打开,取出一盒未拆封的20x20厘米製备型硅胶板,放到李靖川面前。
“板子我有。溶剂药品,按需申请。”王主任的声音依旧没什么温度,但话里的意思却再明白不过,“不过小李,这条路可不好走。点样、展开、刮板、洗脱、浓缩……每一次都是体力活,都是损耗。你可能忙活几个星期,最后得到的还是不够纯、不够量的东西。”
李靖川接过那盒沉甸甸的板子,感受著指尖传来的分量。
“我知道,王主任。”他平静地回答,声音里没有畏难,只有一种找到方向后的沉稳,“但只要有路,就能走下去。一点点积累,一点点纯化。mis-1就在那里,我们总能碰到它。”
灯光下,那盒硅胶板安静地躺著,即將成为一场漫长、枯燥,却目標明確的微观“淘金”战役的主战场。
而探索者已经挽起袖子,准备用最原始也最执拗的方式,从复杂的生命分泌物中,打捞出那一点可能照亮机理的微光。
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